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研域跟你詳談ELISA夾心法中抗體質(zhì)量的重要性（請猛戳）
發(fā)布時(shí)間： 2019-07-11 點(diǎn)擊次數(shù)： 1543次理論上運(yùn)用*挑選的親和純化抗體可得到高特異性，高敏感度的免疫測定。但是，由于經(jīng)濟(jì)原因或是缺乏適宜的試劑，使得許多工作者采用低純度的制品，這種試劑一般含有與試驗(yàn)中其它成分起交叉反響的抗體?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在用抗人IgG抗血清的抗體時(shí)，抗體中含有不需要的抗體交叉反響。但當(dāng)運(yùn)用親和純的抗血清時(shí)，交叉反響不明顯。
研討任何ELISA系統(tǒng)，為了控制不需要的交叉反響，就要不吝運(yùn)用親和純試劑。運(yùn)用抗IgG血清抗體作為包被抗體，有時(shí)本底確實(shí)很低，但它的敏感度比僅運(yùn)用親和純制品要低50-100倍。在高敏感度的試驗(yàn)中使用關(guān)閉試劑是很重要的。zui終挑選非親和純抗IgG血清抗體是根據(jù)這樣設(shè)想：包被抗體或是結(jié)合的人IgG（抗原）與指示抗體有交叉反響，則過量的與指示抗體同種動(dòng)物的血清，就可以關(guān)閉與酶標(biāo)抗體的不要的結(jié)合。但是人血清白蛋白中含有少數(shù)的IgA和IgG會(huì)干擾檢測。人血清白蛋白只適用于IgE的測定。同樣，不能用牛血清白蛋白。由于其間含有微量的牛IgG。
抗血清抗體與親和純抗體對ELISA夾心法成果的影響可從下面試驗(yàn)看出：
試驗(yàn)A：包被抗體為粗制的綿羊抗人IgG抗體，指示抗體（檢抗）為粗制山羊抗人IgG抗體
試驗(yàn)B：包被抗體為親和純的綿羊抗人IgG抗體，指示抗體（檢抗）為粗制山羊抗人IgG抗體
試驗(yàn)C：包被抗體為粗制的綿羊抗人IgG抗體，指示抗體為親和純的山羊抗人IgG抗體
試驗(yàn)D：包被抗體和指示抗體都是親和純的兔抗人IgG抗體。
試驗(yàn)中運(yùn)用5%血清（與指示抗體同物種來歷）進(jìn)行關(guān)閉，其他夾心法ELISA步驟相同。
成果顯現(xiàn)，當(dāng)粗制的抗IgG血清抗體被用在夾心法的兩頭（如試驗(yàn)a曲線）時(shí)，本底很高且曲線坡度不明顯。雖然能成功使用此抗體類型，但問題是一種抗體結(jié)合另一種抗體?？赡馨l(fā)生了山羊指示抗體結(jié)合了綿羊包被抗體，由于稀釋液中的山羊血清過剩也不能下降本底值。當(dāng)使用親和純化的包被抗體時(shí)（如試驗(yàn)b曲線），本底恰當(dāng)下降而且形成了規(guī)范曲線。但是，大多數(shù)工作者認(rèn)為本底仍偏高，工作范圍有限（2-60ng/ml）。當(dāng)親和純的指示抗體與粗制包被抗體聯(lián)合運(yùn)用時(shí)（如試驗(yàn)c曲線），本底大大較低，但敏感度約為100-200ng/ml，再者工作范圍仍受限。當(dāng)*運(yùn)用親和純的抗體時(shí)（如試驗(yàn)d曲線），本底低，敏感度大大改進(jìn)且工作范圍廣（2-500ng/ml）。